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EDTA(乙二胺四乙酸)與DTPA(二乙烯三胺五乙酸)HPLC直接分離分享
EDTA DTPA
根據(jù)樣品分子結(jié)構(gòu)式可知,EDTA包含兩個(gè)氨基(-NH)和四個(gè)羧基(-COOH),而DTPA比EDTA多了一個(gè)氨基(-NH)和一個(gè)羧基(-COOH)。EDTA和DTPA具有多個(gè)羧酸基團(tuán)使其具有強(qiáng)酸性,而氨基則賦予其弱堿性,由于羧酸基團(tuán)比氨基數(shù)量多,因此EDTA和DTPA在溶液中主要表現(xiàn)為酸性。
EDTA和DTPA是市面上常見的螯合劑,部分溶于水,需要借助其螯合作用加入“NaOH”助溶,使其鈉鹽的形式存在。
考慮以上兩個(gè)化合物,同時(shí)存在酸、堿基團(tuán),且極性較大。我們考慮采用同時(shí)具有“陰陽(yáng)離子交換(陽(yáng)陰離子排斥)+Hilic”作用能力的Comixsil ACRP色譜柱(嵌入了陰離子與陽(yáng)離子的親水短鏈烷基鍵合硅膠柱)進(jìn)行分析。
色譜柱
Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm(貨號(hào):FMG-ACRP-EONU)
檢測(cè)器條件
ELSD,40℃;2.5L/min
流速
1.0ml/min
柱溫
25℃
進(jìn)樣體積
10μl
樣品配置
1. 稱取EDTA 3.2mg 加入1ml(70℃)超純水溶解,再加入50μl 1MNaOH混勻過(guò)0.22μm濾膜。
2. 稱取DTPA 2.2mg 加入1ml(70℃)超純水溶解,再加入50μl 1MNaOH混勻,再超聲5min過(guò)0.22μm濾膜。
3. 混標(biāo)用移液槍吸取EDTA與DTPA過(guò)濾液各200μl等比例混勻,即可。
流動(dòng)相
T(min)
100mM 甲酸銨溶液(pH 4)
乙腈
25
75
色譜圖:
Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm
空白對(duì)照色譜圖(0.05M NaOH)
EDTA樣品色譜圖
DTPA樣品色譜圖
混標(biāo)色譜圖
空白對(duì)照與EDTA、DTPA和混標(biāo)對(duì)比圖
結(jié)果分析:
使用Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm色譜柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn),由色譜圖可見,分離度分別為7.9與7.8,分離情況良好,且理論塔板數(shù)>5000(在10000左右),要縮短時(shí)間,也可嘗試本款柱子的其他規(guī)格(如Comixsil ACRP 3μ 150*4.6mm, 貨號(hào):FMF-ACRP3-EONU)進(jìn)行改善。同時(shí)該方法也可用于CAD, MS檢測(cè)器。
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